Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах

Введение

01.01.2016 года, в отечественную Фармакопею была впервые введена ОФС.1.5.3.0011.15: Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах. Требования статьи распространяются на лекарственное растительное сырьё и лекарственные растительные препараты, независимо от формы выпуска, на этапах переработки лекарственного растительного сырья, при производстве лекарственных растительных препаратов, хранении, транспортировании, закупке, ввозе в страну, сертификации и реализации (далее обращение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов).

Содержание остаточных пестицидов, как правило, определяют в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, получаемых от культивируемых лекарственных растений.

Одним из методов анализа в данной статье является жидкостная (ВЭЖХ/МС) хроматография с масс-спектрометрическим детектором. Данный метод имеет высокую чувствительность и хорошую повторяемость, а также полностью соответствует требованиям фармакопеи по предельным значениям запрещенных остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.

Данная статья демонстрирует возможность применения системы LC/MS EXPEC 5210 для определения 4 остаточных пестицидов и их метаболитов в рамках ОФС.1.5.3.0011.15, а также других 26 пестицидов, не входящих в данный список.

Подготовка пробы к анализу

Для анализа использовался альтернативный способ пробоподготовки с использованием картриджей для твердофазной экстракции в качестве стадии очистки анализируемого образца после проведения прямой экстракции.

Метод прямой экстракции: исследуемый объект измельчают и просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Навеска 5 г измельченного объекта помещается в центрифужную пробирку вместимостью 100 мл, добавляют 1 г хлорида натрия, встряхивают и добавляют 50 мл ацетонитрила. Гомогенизируют в лабораторном блендере в течение 2 минут на скорости не ниже 12000 оборотов в минуту. Последующее центрифугирование образца проводят на скорости 4000 об/мин до полного разделения слоев экстракта. Верхний слой (супернатант) отделяют. Затем снова добавляют 50 мл ацетонитрила к пробе, гомогенизируют в течение 1 минуты и снова центрифугируют. Оба экстракта объединяют и концентрируют до объема в 35 мл, охлаждают и доводят ацетонитрилом до 10 мл, тщательно перемешивают.

ТФЭ: отбирают 3-5 мл полученного прямой экстракцией аналита, пропускают через колонку ТФЭ с гидрофильными и гидрофобными материалами (HLB) массой 200 г. Очищенную фракцию собирают и анализируют.

Эксперимент

Стандартные вещества и реагенты: смесь стандартов из 30-ти пестицидов (CDAA-M- 490361-JZ-2ml); метанол и ацетонитрил для хроматографии, хранение осуществлялось при комнатной температуре; муравьиная и уксусная кислоты для хроматографии с чистотой 98%  хранились при комнатной температуре; формиат аммония для хроматографии с чистотой 99% хранился при комнатной температуре.

Прибор: сверхвысокоэффективный жидкостной хроматограф (специально оснащенный бинарным насосом сверхвысокого давления, автоматическим пробоотборником сверхвысокого давления (включая функцию охлаждения) и термостатом для колонки) в сочетании с тройным квадрупольным масс- спектрометром EXPEC-5210.

Линейный диапазон и предел обнаружения

Растворы для построения кривой стандартов были получены путем разбавления стандартных растворов ацетонитрилом. Исследуемые концентрации: 0,1 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,5 нг/мл, 1 нг/мл, 2 нг/мл, 5 нг/мл, 10 нг/мл, 20 нг/мл, 50 нг/мл и 100 нг/мл. Полученная смесь стандартов из 30-ти пестицидов анализировалась на ВЭЖХ-МС/МС. Алдикарб, изофенфос-метил, форат, форатсульфон и фентион линейны в диапазоне концентраций 0,5-100 нг/мл.

Остальные пестициды линейны в диапазоне концентраций 0,2-100 нг/мл, коэффициент корреляции более 0,99. Для проверки соответствия предела обнаружения необходимым требованием в УВЭЖХ-МС/МС вводилась проба малой концентрации, выбранная из стандартных растворов. После проводился расчет предела обнаружения относительно интенсивности полученного сигнала каждого пика. Результаты полностью отвечают требованием по значениям предела обнаружения для всех пестицидов согласно ОФС.1.5.3.0011.15.

Рис. 2 Хроматограмма 30 пестицидов (2 нг/мл)

Точность измерений

Для определения точности измерений смесь стандартного раствора (2 нг/мл) анализировалась в количестве 6-ти повторений. На основе этих данных рассчитывался RSD площади хроматографического пика каждого вещества. Результаты представлены в таблице 3.

Степень извлечения веществ

Для анализа степени извлечения смесь стандартных веществ (алдикарб, изофенфосфатметил, форат, форатсульфон и фенатион в количестве 5 мкг/кг и другие соединения в количестве 2 мкг/кг) добавлялась в три тестовых раствора. Результаты представлены в таблице 4.

После экстракции из образца лекарственного растительного сырья и последующей очистки экстракта можно быстро и точно провести скрининг и определение 30 пестицидов с использованием системы ВЭЖХ-МС/МС EXPEC 5210. В данной статье исследуются линейность, точность и степень извлечения при анализе данным методом.

Используемый аналитический метод, полностью соответствует требованиям ОФС.1.5.3.0011.15.

• концентрации испытуемого раствора и раствора сравнения, а также настройки аппаратуры должны быть такими, чтобы аналитический сигнал, используемый для количественного анализа пестицидов, находился в пределах линейного диапазона используемого детектора;

• каждый пестицид извлекается в диапазоне 70-110 %;

• повторяемость и воспроизводимость метода: относительное стандартное отклонение находится в пределах 5,77%

Система EXPEC 5210 с высокой чувствительностью может быть использована для точного количественного определения остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.