Техника пипетирования

Работа с автоматической пипеткой не такая простая, как кажется на первый взгляд. Процесс пипетирования с помощью автоматики имеет свою специфику и нюансы. В статье описаны техники пипетирования, указаны рекомендации по дозированию и советы по работе с разными субстанциями.

Техники пипетирования

Прямой метод

Чаще всего в исследованиях используют именно прямой метод пипетирования. Он применяется для водных растворов, например, буферов, а также для разбавленных кислот и щелочей. Этим способом пользуются тогда, когда нужно внести отобранный объем в другую жидкость, а затем смешать с помощью пипетирования. Метод предполагает выполнение следующих шагов:

• надавить на операционную кнопку до первого стопа;
• опустить наконечник в раствор для дозировки и мягко ослабить нажим на кнопку;
• извлечь наконечник, осторожно устраняя лишний раствор о стенки емкости;
• спустить отобранный раствор, мягко надавливая на кнопку до первого стопа;
• после небольшого перерыва дожать кнопку до упора (до второго стопа), наконечник должен полностью опустошиться;
• удерживая кнопку, убрать наконечник из раствора, прикасаясь к стенке емкости;
• ослабить нажим на кнопку до принятия ею исходного положения;
• заменить наконечник, если нужно, продолжить процесс пипетирования.

Обратный метод

Метод обратного пипетирования используется в процессе работы с вязкими веществами, а также с субстанциями, склонными к вспениванию. Способ подходит для обработки небольших объемов исследуемого материала, предотвращает вспенивание и пузырение жидкости.

Обратный метод выполняется следующим образом:

• надавить на операционную кнопку до первого стопа;
• опустить наконечник в раствор для дозировки и мягко ослабить нажим на кнопку (наконечник должен наполниться);
• извлечь насадку, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
• надавить на операционную кнопку до первого стопа, спустить содержимое в приемную емкость;
• в наконечнике должно остаться небольшое количество раствора, который не должен включиться в дозируемый раствор;
• удалить остатки раствора: снять насадку или слить обратно в исходный объем, нажимая операционную кнопку до второго стопа (упора).

Серийное пипетирование

Метод применяется для многоразового дозирования одинакового объема. Способ используется для добавления веществ в пробирки или лунки микропланшетов. По способу исполнения считается измененным методом обратного пипетирования. Для его выполнения требуется сделать следующие манипуляции:

• надавить на операционную кнопку до второго стопа (до упора);
• опустить насадку в раствор для дозирования, мягко ослабить нажим на кнопку (наконечник должен наполниться);
• извлечь насадку, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
• надавить на операционную кнопку до первого стопа, слить содержимое в приемную емкость, удерживать кнопку в этой позиции;
• удерживая кнопку, погрузить насадку в исходный объем вещества;
• повторить манипуляции снова.

Пипетирование гетерогенных образцов

Способ используется в работе с образцами, неоднородными по составу: кровь, сыворотка и т.д. Подходит для ситуаций, когда образца мало и весь материал необходимо отработать. Технология выполняется в несколько шагов:

• надавить на операционную кнопку до первого стопа;
• опустить насадку в раствор для дозировки, мягко ослабить нажим на кнопку;
• извлечь наконечник, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
• погрузить насадку в целевой раствор, надавить на кнопку до первого стопа, аккуратно ослабить нажим на кнопку;
• насадку из раствора не убирать, повторить манипуляции неоднократно до очистки внутренней стенки наконечника;
• извлечь насадку, осторожно прикасаясь ею к краям емкости;
• надавить кнопку до упора, опустошить весь наконечник;
• ослабить нажатие на кнопку до исходного положения.

Советы при работе с автоматической пипеткой

1. Убедитесь, что вы правильно подобрали насадку к автопипетке. Она должна как следует примыкать к дозатору. Максимальная точность дозировки достигается при минимальной воздушной подушке, которая зависит от параметров пипетки и насадки. Для объема 100 мкл оптимальной будет пипетка 10-100 мкл.
2. Контролируйте опускание насадки. Чем меньше погружение, тем меньше жидкости попадет снаружи. Погружение должно быть достаточно глубоким, чтобы не собрать воздух.
3. Осматривайте насадку после забора жидкости на наличие капель с внешней части. При извлечении из емкости устраните лишний раствор о край емкости.
4. Держите автопипетку в вертикальном положении в процессе набора жидкости. При изменении угла наклона может измениться гидростатическое давление.
5. Чтобы достичь максимальной точности, необходимо увлажнить воздух в дозаторе. Для этого неоднократно пропипетируйте жидкость, прежде чем осуществить отбор.
6. Отобранную жидкость необходимо выпускать правильно. Для этого нужно прикоснуться к стенке приемной емкости насадкой. Если объем отобранного вещества менее 10 мкл, выпускайте его прямо в жидкость, содержащуюся в приемной емкости.
7. Точная и хорошая повторяемость возможна при медленном и без рывков пипетировании.
8. Перед исследованием дайте температуре реагентов и дозатора выровняться с температурой окружающей среды. Жидкие вещества расширяются или становятся более плотными в зависимости от температуры. Давление пара жидкости и влажность, от которых зависит дозируемый объем, также зависит от температуры.