Техника пипетирования
- Главная страница
- Пресс-центр
- Техника пипетирования
Работа с автоматической пипеткой не такая простая, как кажется на первый взгляд. Процесс пипетирования с помощью автоматики имеет свою специфику и нюансы. В статье описаны техники пипетирования, указаны рекомендации по дозированию и советы по работе с разными субстанциями.
Техники пипетирования
Прямой метод
Чаще всего в исследованиях используют именно прямой метод пипетирования. Он применяется для водных растворов, например, буферов, а также для разбавленных кислот и щелочей. Этим способом пользуются тогда, когда нужно внести отобранный объем в другую жидкость, а затем смешать с помощью пипетирования. Метод предполагает выполнение следующих шагов:
- надавить на операционную кнопку до первого стопа;
- опустить наконечник в раствор для дозировки и мягко ослабить нажим на кнопку;
- извлечь наконечник, осторожно устраняя лишний раствор о стенки емкости;
- спустить отобранный раствор, мягко надавливая на кнопку до первого стопа;
- после небольшого перерыва дожать кнопку до упора (до второго стопа), наконечник должен полностью опустошиться;
- удерживая кнопку, убрать наконечник из раствора, прикасаясь к стенке емкости;
- ослабить нажим на кнопку до принятия ею исходного положения;
- заменить наконечник, если нужно, продолжить процесс пипетирования.
Обратный метод
Метод обратного пипетирования используется в процессе работы с вязкими веществами, а также с субстанциями, склонными к вспениванию. Способ подходит для обработки небольших объемов исследуемого материала, предотвращает вспенивание и пузырение жидкости.
Обратный метод выполняется следующим образом:
- надавить на операционную кнопку до первого стопа;
- опустить наконечник в раствор для дозировки и мягко ослабить нажим на кнопку (наконечник должен наполниться);
- извлечь насадку, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
- надавить на операционную кнопку до первого стопа, спустить содержимое в приемную емкость;
- в наконечнике должно остаться небольшое количество раствора, который не должен включиться в дозируемый раствор;
- удалить остатки раствора: снять насадку или слить обратно в исходный объем, нажимая операционную кнопку до второго стопа (упора).
Серийное пипетирование
Метод применяется для многоразового дозирования одинакового объема. Способ используется для добавления веществ в пробирки или лунки микропланшетов. По способу исполнения считается измененным методом обратного пипетирования. Для его выполнения требуется сделать следующие манипуляции:
- надавить на операционную кнопку до второго стопа (до упора);
- опустить насадку в раствор для дозирования, мягко ослабить нажим на кнопку (наконечник должен наполниться);
- извлечь насадку, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
- надавить на операционную кнопку до первого стопа, слить содержимое в приемную емкость, удерживать кнопку в этой позиции;
- удерживая кнопку, погрузить насадку в исходный объем вещества;
- повторить манипуляции снова.
Пипетирование гетерогенных образцов
Способ используется в работе с образцами, неоднородными по составу: кровь, сыворотка и т.д. Подходит для ситуаций, когда образца мало и весь материал необходимо отработать. Технология выполняется в несколько шагов:
- надавить на операционную кнопку до первого стопа;
- опустить насадку в раствор для дозировки, мягко ослабить нажим на кнопку;
- извлечь наконечник, осторожно устраняя лишний раствор о стенку емкости;
- погрузить насадку в целевой раствор, надавить на кнопку до первого стопа, аккуратно ослабить нажим на кнопку;
- насадку из раствора не убирать, повторить манипуляции неоднократно до очистки внутренней стенки наконечника;
- извлечь насадку, осторожно прикасаясь ею к краям емкости;
- надавить кнопку до упора, опустошить весь наконечник;
- ослабить нажатие на кнопку до исходного положения.
Советы при работе с автоматической пипеткой
- Убедитесь, что вы правильно подобрали насадку к автопипетке. Она должна как следует примыкать к дозатору. Максимальная точность дозировки достигается при минимальной воздушной подушке, которая зависит от параметров пипетки и насадки. Для объема 100 мкл оптимальной будет пипетка 10-100 мкл.
- Контролируйте опускание насадки. Чем меньше погружение, тем меньше жидкости попадет снаружи. Погружение должно быть достаточно глубоким, чтобы не собрать воздух.
- Осматривайте насадку после забора жидкости на наличие капель с внешней части. При извлечении из емкости устраните лишний раствор о край емкости.
- Держите автопипетку в вертикальном положении в процессе набора жидкости. При изменении угла наклона может измениться гидростатическое давление.
- Чтобы достичь максимальной точности, необходимо увлажнить воздух в дозаторе. Для этого неоднократно пропипетируйте жидкость, прежде чем осуществить отбор.
- Отобранную жидкость необходимо выпускать правильно. Для этого нужно прикоснуться к стенке приемной емкости насадкой. Если объем отобранного вещества менее 10 мкл, выпускайте его прямо в жидкость, содержащуюся в приемной емкости.
- Точная и хорошая повторяемость возможна при медленном и без рывков пипетировании.
- Перед исследованием дайте температуре реагентов и дозатора выровняться с температурой окружающей среды. Жидкие вещества расширяются или становятся более плотными в зависимости от температуры. Давление пара жидкости и влажность, от которых зависит дозируемый объем, также зависит от температуры.
и приглашать на предстоящие выставки и семинары